Plásmido Doble Nickase (h) ATF-5: sc-416821-NIC

ATF5 codifica el factor de transcripción activador 5 (ATF-5), un factor de transcripción de tipo cremallera de leucina básica que coordina programas de expresión génica vinculados a la adaptación al estrés celular, la supervivencia y el mantenimiento del linaje celular. La actividad de ATF-5 suele integrarse con la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas y de la respuesta integrada al estrés, incluida la regulación transcripcional dependiente del eje PERK–eIF2α–ATF4, y puede influir en la homeostasis mitocondrial y en redes transcripcionales relacionadas con la apoptosis. En muchos sistemas celulares, ATF-5 favorece la proliferación y la resistencia al estrés metabólico o proteotóxico, lo que lo hace relevante para estudios de señalización oncogénica, estados de diferenciación y remodelación transcripcional inducida por estrés. Se ha informado de una expresión desregulada de ATF5 en múltiples contextos tumorales y modelos neurobiológicos, lo que respalda la investigación de sus dianas aguas abajo y de las dependencias de vías en fenotipos asociados a enfermedad.

ATF-5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATF5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATF5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATF5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATF5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.