ATE1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405539

Übersicht

ATE1 kodiert die Arginyltransferase 1, ein Schlüsselenzym des N-End-Rule-Signalwegs, das posttranslational Arginin an Protein-N-Termini anhängt und dadurch Degrons erzeugt, die Substrate einem ubiquitinabhängigen proteasomalen Abbau zuführen. Über die Regulation der Proteinstabilität beeinflusst ATE1 die Proteostase, die Organisation des Zytoskeletts und stressresponsive Signalwege und wurde mit der Kontrolle von Zellmigration und -adhäsion in Verbindung gebracht, unter anderem durch Modulation aktinassoziierter Proteine. Die ATE1-abhängige Arginylierung trägt zudem zur Anpassung an mitochondriale und oxidative Stresssituationen bei, indem sie die Menge ausgewählter Regulatoren mitbestimmt. Eine Fehlregulation von Komponenten der N-End-Rule, einschließlich ATE1, ist mit veränderter zellulärer Homöostase assoziiert, was in experimentellen Systemen für Krebsbiologie, Neurodegeneration und Entwicklungsphänotypen relevant ist.

Das ATE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATE1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATE1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATE1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATE1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATE1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATE1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATE1-Exone abzielen, die für die ATE1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATE1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATE1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATE1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATE1 HDR-Plasmid (h) und ATE1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATE1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATE1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.