ATAD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413720

Panoramica

ATAD1 (ATPase family AAA domain containing 1) è un’ATPasi AAA+ della membrana esterna mitocondriale che svolge una funzione di controllo qualità proteico, estraendo e rimuovendo dalla membrana proteine tail-anchored mal localizzate o danneggiate. Grazie alla sua attività di dislocasi dipendente dall’ATP, ATAD1 поддерживает l’omeostasi mitocondriale, coopera con le vie ubiquitina–proteasoma e influenza le risposte allo stress dell’organello che incidono sul metabolismo e sulla sopravvivenza cellulare. L’alterazione della sorveglianza delle proteine di membrana dipendente da ATAD1 può modificare la dinamica mitocondriale e la proteostasi, processi spesso studiati nel contesto della neurodegenerazione, della disregolazione metabolica e del rimodellamento mitocondriale associato al cancro. In quanto regolatore del turnover delle proteine mitocondriali, ATAD1 rappresenta un nodo utile per indagare come il controllo qualità dell’organello si intersechi con la segnalazione dell’apoptosi e con l’adattamento cellulare allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATAD1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATAD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATAD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATAD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATAD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATAD1 per lo studio della segnalazione di ATAD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATAD1 critici per la funzione di ATAD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATAD1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATAD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ATAD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATAD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATAD1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ATAD1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATAD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATAD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.