ATAD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413720

Übersicht

ATAD1 (ATPase family AAA domain containing 1) ist eine AAA+-ATPase der äußeren Mitochondrienmembran, die in der Proteinkontrolle (Protein-Quality-Control) wirkt, indem sie fehlgeleitete oder beschädigte „tail-anchored“-Proteine aus der Membran herauszieht und entfernt. Durch seine ATP-abhängige Dislokase-Aktivität unterstützt ATAD1 die mitochondriale Homöostase, koordiniert sich mit Ubiquitin–Proteasom-Pathways und beeinflusst Organell-Stressantworten, die den zellulären Stoffwechsel und das Überleben der Zelle mitbestimmen. Störungen der ATAD1-abhängigen Überwachung von Membranproteinen können die mitochondriale Dynamik und die Proteostase verändern – Prozesse, die häufig im Kontext von Neurodegeneration, metabolischer Dysregulation und krebsassoziiertem mitochondrialem Remodeling untersucht werden. Als Regulator des mitochondrialen Proteinumsatzes ist ATAD1 ein nützlicher Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie Organell-Quality-Control mit Apoptose-Signalwegen und zellulärer Stressanpassung zusammenwirkt.

Das ATAD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATAD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATAD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATAD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATAD1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATAD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATAD1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATAD1-Exone abzielen, die für die ATAD1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATAD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATAD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATAD1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATAD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATAD1 HDR-Plasmid (h) und ATAD1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATAD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATAD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.