ASPP1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404330-LAC

PPP1R13B kodiert „apoptosis-stimulating of p53 protein 1“ (ASPP1), einen Regulator stressresponsiver Transkription, der das proapoptotische Transkriptionsprogramm von TP53 und verwandten Familienmitgliedern verstärkt. ASPP1 ist an der DNA-Schadensantwort, der Kontrolle von Zellzyklus-Checkpoints und der Apoptose beteiligt, indem es promotorselektive Transkriptionsausgänge moduliert und so chromatinassoziierte Signalgebung mit Schicksalsentscheidungen verknüpft. Eine veränderte PPP1R13B-Expression oder eine dysregulierte Aktivität der ASPP1–p53-Achse wurde in mehreren Krebskontexten mit Tumorentstehung und Resistenz gegenüber genotoxischem Stress in Verbindung gebracht, was es für Studien zu onkogener Signalgebung, Genomstabilität und apoptotischen Schwellenwerten relevant macht. Diese Funktionen machen ASPP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie transkriptionelle Koregulatoren die Aktivität des p53-Signalwegs in unterschiedlichen Zelltypen feinabstimmen.

ASPP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PPP1R13B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ASPP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PPP1R13B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ASPP1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PPP1R13B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.