Plásmido Doble Nickase (m) ASPP1: sc-423473-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ASPP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ASPP1 (m) y el plásmido de doble nickasa ASPP1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ppp1r13b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ASPP1 Anticuerpo (LX011): sc-53903
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ASPP1 | sc-423473-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Ppp1r13b de ratón codifica la proteína estimuladora de apoptosis de p53 1 (ASPP1), un regulador nuclear que modula programas transcripcionales que controlan la apoptosis, los puntos de control del ciclo celular y las respuestas al estrés. ASPP1 interactúa con miembros de la familia de p53 e influye en la expresión de dianas proapoptóticas, lo que la vincula con la señalización del daño en el ADN y el control transcripcional asociado a la cromatina. A través de estas interacciones, ASPP1 contribuye a decisiones sobre el destino celular relevantes para la supresión tumoral, la estabilidad genómica y la homeostasis tisular. La actividad o expresión desregulada de ASPP1 se ha asociado con umbrales apoptóticos alterados y fenotipos relacionados con el cáncer, lo que respalda su estudio en vías oncogénicas y redes de respuesta al daño.
ASPP1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ppp1r13b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ppp1r13b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ppp1r13b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ppp1r13b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.