ASH1L CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431404-ACT

Das Mausgen **Ash1l** kodiert **ASH1L**, eine SET-Domänen-Histon-Lysin-Methyltransferase, die als Regulator der Trithorax-Gruppe die Chromatinzugänglichkeit und das transkriptionelle Gedächtnis während der Entwicklung steuert. Die Aktivität von ASH1L ist mit der H3K36-Methylierung sowie der Antagonisierung der Polycomb-vermittelten Repression verknüpft und unterstützt damit Genexpressionsprogramme, die die Festlegung des Zellschicksals, die neuronale Differenzierung und die synaptische Funktion bestimmen. Über diese epigenetischen Mechanismen trägt ASH1L zur Regulation transkriptioneller Netzwerke und von RNA-Verarbeitungsmodulen bei, die für Lineage-Festlegung und Reifung wichtig sind. Eine Fehlregulation von ASH1L wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderten Genexpressionszuständen in Verbindung gebracht, die für die Forschung zu Autismus-Spektrum-Störungen und intellektueller Beeinträchtigung relevant sind.

ASH1L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ash1l-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ASH1L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ash1l-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ash1l-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ASH1L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ash1l-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ASH1L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ASH1L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ash1l-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.