Partículas Lentivirales de Activación (m) ASC/TMS1/PYCARD: sc-426209-LAC

Pycard codifica ASC/TMS1/PYCARD, un adaptador esencial de los complejos del inflamasoma que conecta proteínas sensoras como NLRP3 y AIM2 con CASP1 a través de sus dominios PYD y CARD. La polimerización de ASC impulsa el ensamblaje del inflamasoma, la activación de la caspasa-1 y la posterior maduración de IL-1β e IL-18, vinculando la detección de patógenos y señales de peligro con la señalización inflamatoria y los programas de muerte celular piroptótica. En células de ratón, la actividad del inflamasoma dependiente de Pycard influye en las respuestas inmunitarias innatas, la activación de macrófagos y células dendríticas, y la remodelación tisular dependiente de citocinas. La señalización de ASC desregulada se ha implicado en fenotipos inflamatorios y similares a autoinmunidad, susceptibilidad a infecciones y patología asociada a la inflamación, lo que convierte a Pycard en un nodo clave para estudiar las vías de la inmunidad innata.

Las partículas de activación lentiviral ASC/TMS1/PYCARD (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Pycard en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ASC/TMS1/PYCARD (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Pycard, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ASC/TMS1/PYCARD. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Pycard y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.