ASC/TMS1/PYCARD Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426209-LAC

Pycard codifica ASC/TMS1/PYCARD, un adattatore essenziale dei complessi dell’inflammasoma che, tramite i suoi domini PYD e CARD, mette in collegamento proteine sensore come NLRP3 e AIM2 con CASP1. La polimerizzazione di ASC guida l’assemblaggio dell’inflammasoma, l’attivazione della caspasi-1 e la successiva maturazione di IL-1β e IL-18, collegando il riconoscimento di patogeni e segnali di pericolo alla segnalazione infiammatoria e ai programmi di morte cellulare piroptotica. Nelle cellule murine, l’attività dell’inflammasoma dipendente da Pycard influenza le risposte dell’immunità innata, l’attivazione di macrofagi e cellule dendritiche e il rimodellamento tissutale dipendente dalle citochine. Una segnalazione ASC deregolata è stata implicata in fenotipi infiammatori e simil-autoimmuni, nella suscettibilità alle infezioni e in patologie associate all’infiammazione, rendendo Pycard un nodo chiave per lo studio delle vie dell’immunità innata.

Le particelle di attivazione lentivirale ASC/TMS1/PYCARD (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pycard in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ASC/TMS1/PYCARD (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pycard, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ASC/TMS1/PYCARD. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pycard e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.