Plásmido Doble Nickase (m) ASC/TMS1/PYCARD: sc-426209-NIC

Pycard codifica ASC (también conocida como TMS1/PYCARD), una proteína adaptadora que acopla sensores citosólicos de reconocimiento de patrones con la activación de la caspasa‑1 durante el ensamblaje del inflamasoma. ASC promueve la formación de “specks” supramoleculares de ASC y favorece la maduración de IL‑1β e IL‑18, vinculando la detección inmunitaria innata con la muerte celular piroptótica y la señalización inflamatoria. En sistemas murinos, las vías dependientes de Pycard se interconectan con el cebado por NF‑κB, los inflamasomas NLRP3/AIM2 y respuestas al estrés que modelan la activación mieloide y la inflamación tisular. La señalización desregulada de ASC se ha asociado con fenotipos inflamatorios y autoinmunes y se estudia con frecuencia en modelos de infección, neuroinflamación, inflamación metabólica e inmunidad asociada a tumores.

ASC/TMS1/PYCARD El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pycard en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pycard. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pycard. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pycard alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.