Plásmido CRISPR de Activación (h) ASC/TMS1/PYCARD: sc-400151-ACT

PYCARD codifica ASC (también conocida como TMS1), una proteína adaptadora citosólica que nuclea el ensamblaje del inflamasoma y conecta los receptores de reconocimiento de patrones situados aguas arriba con la activación de caspasas inflamatorias. A través de sus dominios PYD y CARD, ASC promueve la formación de “ASC specks”, facilitando la activación de la caspasa-1 y el procesamiento posterior de IL-1β e IL-18, así como la piroptosis dependiente de gasdermina D. La señalización dependiente de ASC se integra con vías de la inmunidad innata, incluidas NLRP3, AIM2 y otras plataformas de inflamasoma relacionadas, modulando la defensa antimicrobiana y la inflamación estéril. La actividad desregulada de PYCARD/ASC se ha implicado en mecanismos de enfermedades inflamatorias y autoinmunes, y se estudia con frecuencia en contextos de infección, neuroinflamación y señalización inmunitaria asociada a tumores.

ASC/TMS1/PYCARD El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PYCARD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASC/TMS1/PYCARD El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PYCARD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PYCARD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASC/TMS1/PYCARD. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PYCARD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASC/TMS1/PYCARD en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASC/TMS1/PYCARD en células tumorales con expresión de PYCARD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.