ASC-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425141

Panoramica

Trip4 codifica ASC-1, un coattivatore della trascrizione che opera all’interno del complesso Activating Signal Cointegrator-1 (ASC-1) per collegare fattori di trascrizione specifici per sequenza al macchinario della RNA polimerasi II. ASC-1 contribuisce alla regolazione di programmi di espressione genica legati alla segnalazione dei recettori nucleari e a un controllo trascrizionale più ampio, inclusi processi che influenzano differenziamento, metabolismo e risposte cellulari allo stress. Nei sistemi murini, la modulazione trascrizionale dipendente da Trip4 viene utilizzata per analizzare come i coattivatori integrino input di segnalazione e plasmino output trascrizionali associati alla cromatina. Alterazioni della funzione del complesso ASC-1 sono state associate a programmi genici dello sviluppo e neuromuscolari deregolati, a supporto della sua rilevanza per lo studio di reti trascrizionali associate alla malattia senza implicare esiti clinici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Asc-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trip4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trip4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trip4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Asc-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trip4 per lo studio della segnalazione di Asc-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trip4 critici per la funzione di Asc-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trip4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Asc-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Asc-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trip4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Asc-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Asc-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trip4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trip4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.