ASC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425141

Übersicht

Trip4 kodiert ASC-1, einen transkriptionellen Koaktivator, der im Activating Signal Cointegrator-1 (ASC-1)-Komplex wirkt und sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase‑II-Maschinerie koppelt. ASC-1 trägt zur Regulation von Genexpressionsprogrammen bei, die mit der Signalübertragung über nukleäre Rezeptoren und einer umfassenderen transkriptionellen Kontrolle verknüpft sind, darunter Prozesse, die Differenzierung, Stoffwechsel und zelluläre Stressantworten beeinflussen. In Mausmodellen wird die Trip4-abhängige Modulation der Transkription genutzt, um zu untersuchen, wie Koaktivatoren Signaleingänge integrieren und dadurch chromatinassoziierte Transkriptionsausgänge formen. Eine veränderte Funktion des ASC-1-Komplexes wurde mit fehlregulierten Entwicklungs- und neuromuskulären Genprogrammen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Untersuchung krankheitsassoziierter Transkriptionsnetzwerke unterstreicht, ohne klinische Folgen zu implizieren.

Das Asc-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trip4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trip4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trip4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Asc-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trip4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Asc-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trip4-Exone abzielen, die für die Asc-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trip4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Asc-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Asc-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trip4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Asc-1 HDR-Plasmid (m) und Asc-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trip4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trip4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.