ARP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405241

Übersicht

NR2F2 kodiert den menschlichen verwaisten nukleären Rezeptor ARP-1 (auch als COUP-TFII bekannt), einen ligandenunabhängigen Transkriptionsfaktor, der als Mono- oder Heterodimer an DNA bindet und so entwicklungs- und stoffwechselbezogene Genprogramme reguliert. ARP-1 integriert Signaleingänge, die Zellschicksalsentscheidungen, angiogene und lymphangiogene Prozesse sowie die Organogenese über die transkriptionelle Kontrolle von Netzwerken beeinflussen, die mit Crosstalk zwischen nukleären Rezeptoren und Enhancer-Aktivität verknüpft sind. In adulten Geweben beeinflusst NR2F2 die Biologie der vaskulären glatten Muskelzellen und des Endothels, die Adipogenese sowie die mitochondriale/metabolische Homöostase, mit kontextabhängigen Effekten auf Proliferation und Differenzierung. Eine dysregulierte NR2F2-Expression oder -Aktivität wurde mit Krebsbiologie, angeborenen kardiovaskulären Defekten und Stoffwechselstörungen in Verbindung gebracht, wodurch es ein häufig genutzter Knotenpunkt für mechanistische Studien der Transkriptionsregulation und der Linien-/Schicksalsfestlegung ist.

Das ARP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NR2F2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NR2F2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NR2F2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NR2F2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NR2F2-Exone abzielen, die für die ARP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NR2F2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ARP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NR2F2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARP-1 HDR-Plasmid (h) und ARP-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NR2F2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NR2F2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.