Plásmido Doble Nickase (h) ARMS: sc-407360-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ARMS consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARMS (h) y el plásmido de doble nickasa ARMS (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KIDINS220. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARMS Anticuerpo (26): sc-136462
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ARMS | sc-407360-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ARMS | sc-407360-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KIDINS220 codifica ARMS (proteína transmembrana rica en repeticiones de anquirina), un andamiaje multidominio que integra la señalización de los receptores de neurotrofinas y efrinas para coordinar la diferenciación neuronal, la guía axonal y la plasticidad sináptica. ARMS actúa aguas abajo de los receptores Trk para modular las vías MAPK/ERK y PI3K–AKT, conectando la activación del receptor con el tráfico endosomal y la propagación sostenida de la señal. Además de sus funciones en el sistema nervioso, KIDINS220 contribuye a la señalización de células inmunitarias y a la organización del citoesqueleto mediante interacciones con proteínas adaptadoras y quinasas. La alteración genética o cambios en la expresión de KIDINS220 se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con la desregulación de redes de señalización, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el cableado de vías impulsadas por receptores.
ARMS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KIDINS220 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KIDINS220. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KIDINS220. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KIDINS220 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.