ARK-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423197

Übersicht

Aurkb (ARK-2) kodiert eine Serin/Threonin-Kinase, die als katalytischer Kern des Chromosome-Passenger-Komplexes fungiert und Chromosomenkondensation, Fehlerkorrektur bei Kinetochor–Mikrotubuli-Anheftungen sowie die Zytokinese koordiniert. Die ARK-2-Aktivität wird während der Mitose durch phosphorylierungsabhängige Signalübertragung und eine räumliche Umlokalisation von den Zentromeren zur Spindelmittelzone reguliert und koppelt damit die Erfüllung des Spindelkontrollpunkts an eine zuverlässige Chromosomentrennung. Eine Störung von Aurkb beeinträchtigt die Chromatindynamik und die Bildung des kontraktilen Rings und führt zu Aneuploidie und Mikrokernen – Prozesse, die häufig genutzt werden, um Genominstabilität zu untersuchen. Eine veränderte AURKB-Signalgebung wurde mit proliferativen Phänotypen und tumorassoziierter chromosomaler Instabilität in Verbindung gebracht und ist daher ein häufiger Knotenpunkt in der Forschung zu Zellzyklus und mitotischer Genauigkeit.

Das ARK-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aurkb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aurkb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aurkb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARK-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aurkb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARK-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aurkb-Exone abzielen, die für die ARK-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aurkb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARK-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ARK-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aurkb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARK-2 HDR-Plasmid (m) und ARK-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aurkb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aurkb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.