Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ARID1B Double Nickase Plasmid (h): sc-402365-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARID1B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARID1B Double-Nickase-Plasmid (h) und ARID1B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARID1B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ARID1B: sc-32762
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARID1B Double Nickase Plasmid (h) | sc-402365-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARID1B kodiert eine DNA-bindende Untereinheit des ATP-abhängigen Chromatin-Remodeling-Komplexes SWI/SNF (BAF), der die Positionierung von Nukleosomen sowie die Zugänglichkeit von Enhancer- und Promotor-Regionen reguliert und dadurch Transkriptionsprogramme formt. Über seine Funktionen in der Chromatinorganisation beeinflusst ARID1B die Festlegung von Zelllinien, die Kontrolle des Zellzyklus und die differenzierungsassoziierte Genexpression und ist mit Signalwegen verknüpft, die entwicklungsbezogene und stressresponsive Transkription steuern. Eine Störung der ARID1B-Funktion verändert die epigenetische Regulation und die Genauigkeit der Transkription, wodurch es zu einem wichtigen Faktor in Studien zur Genomregulation wird. Eine Fehlregulation von SWI/SNF-Komponenten, einschließlich ARID1B, wird häufig im Zusammenhang mit Entwicklungsstörungen und krebsassoziierten Defekten des Chromatin-Remodelings untersucht.
ARID1B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARID1B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARID1B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARID1B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARID1B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.