ARHGAP17 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403218-ACT

Das humane Gen ARHGAP17 kodiert ein Rho-GTPase-aktivierendes Protein, das bevorzugt CDC42 und verwandte Signale der Rho-Familie herunterreguliert, um den Umbau des Aktinzytoskeletts, die Zellpolarität und den Membrantransport zu koordinieren. Durch die Integration von Signalen, die die Organisation von Zellkontakten und die Motilität prägen, beeinflusst ARHGAP17 Prozesse wie die Regulation der epithelialen Barriere, gerichtete Migration und endozytotische Dynamiken. Eine fehlregulierte Rho-GTPase-Signalgebung unter Beteiligung von ARHGAP17 wurde in der Krebsbiologie mit veränderter Adhäsion und invasiven Phänotypen sowie mit entzündlichen Signalzusammenhängen in Verbindung gebracht, in denen die Kontrolle des Zytoskeletts das Verhalten von Immunzellen beeinflusst. Als Knotenpunkt in Rho-GTPase-Netzwerken wird ARHGAP17 häufig untersucht, um upstream-Rezeptoren mit downstream-Signalwegen zu verknüpfen, die Morphologie, Bewegung und Gewebeorganisation steuern.

ARHGAP17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARHGAP17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ARHGAP17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARHGAP17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARHGAP17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ARHGAP17-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARHGAP17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ARHGAP17-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ARHGAP17-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARHGAP17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.