Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH1 (m): sc-419017

Présentation

Adprh code pour ARH1 (ADP-ribosylarginine hydrolase 1), une enzyme cytosolique qui hydrolyse le mono‑ADP‑ribose lié à l’arginine sur les protéines et contribue au maintien de l’homéostasie de l’ADP‑ribosylation. En inversant la mono‑ADP‑ribosylation, ARH1 influence la signalisation du stress et des dommages à l’ADN, les voies de l’immunité innée et la régulation des fonctions protéiques via le renouvellement des modifications post‑traductionnelles. Une perturbation du métabolisme de l’ADP‑ribose a été associée à des réponses inflammatoires altérées, à des défauts de maintenance du génome et à une dérégulation des programmes de survie cellulaire. Dans des modèles murins, Adprh constitue un point d’entrée exploitable pour étudier comment l’ADP‑ribosylation réversible de l’arginine façonne la résilience cellulaire et des phénotypes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adprh dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adprh, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adprh à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARH1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adprh pour l'étude de la signalisation de ARH1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adprh essentiels à la fonction de ARH1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adprh pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adprh. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARH1 plasmide HDR (m) et le ARH1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adprh pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adprh définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.