Plásmido Doble Nickase (h) ARG1/Arginase 1: sc-418076-NIC

El ARG1 humano codifica la arginasa 1, una metaloenzima citosólica que hidroliza la L-arginina para producir L-ornitina y urea, conectando la eliminación de nitrógeno con el metabolismo de los aminoácidos. Al competir con las sintasas de óxido nítrico por la arginina, ARG1 influye en la biodisponibilidad de óxido nítrico y modula la señalización inmunitaria y vascular, a la vez que aporta ornitina para la biosíntesis de poliaminas y prolina, que sustentan el crecimiento celular y la remodelación de la matriz extracelular. ARG1 es un sello distintivo de los programas mieloides activados alternativamente y contribuye a la polarización metabólica en macrófagos y neutrófilos, con efectos posteriores sobre la función de las células T en tejidos inflamados. La actividad desregulada de ARG1 se asocia con alteraciones del flujo del ciclo de la urea y con fenotipos inmunometabólicos estudiados en cáncer, inflamación crónica y trastornos metabólicos relacionados con el hígado.

ARG1/Arginase 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARG1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARG1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARG1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARG1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.