Partículas Lentivirales de Activación (h) Arg: sc-417779-LAC

ABL2 codifica Arg (ABL2), una tirosina cinasa no receptora que integra señales de receptores de factores de crecimiento y de la adhesión mediada por integrinas para regular la remodelación del citoesqueleto de actina, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling) y la migración celular. Arg actúa en vías que acoplan la señalización por fosforilación con la dinámica del citoesqueleto, incluido el recambio de las adhesiones focales y procesos vinculados a las GTPasas de la familia Rho, y puede modular la endocitosis y las respuestas celulares a estímulos mecánicos. La actividad desregulada de las cinasas de la familia ABL se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo, señalización aberrante de supervivencia y reconfiguración de redes oncogénicas en múltiples contextos tumorales. Como resultado, ABL2/Arg se estudia ampliamente en modelos de motilidad celular, señalización dependiente de la adhesión y crosstalk entre vías impulsadas por cinasas, relevantes para la biología del cáncer y procesos del neurodesarrollo.

Las partículas de activación lentiviral Arg (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ABL2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Arg (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ABL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Arg. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ABL2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.