Arc CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419184

Übersicht

Arc (activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ist ein „immediate early gene“, das durch neuronale Aktivität induziert wird und für die synaptische Plastizität, die Lernen und Gedächtnis bei der Maus zugrunde liegt, essenziell ist. Arc reguliert den endozytotischen Transport von AMPA‑Typ‑Glutamatrezeptoren und koordiniert den Umbau des Aktinzytoskeletts, wodurch es die synaptische Stärke während der Langzeitpotenzierung und Langzeitdepression fein abstimmt. Zudem ist es an aktivitätsabhängigen Genexpressionsprogrammen und am homöostatischen synaptischen Scaling beteiligt, das die Erregbarkeit neuronaler Netzwerke stabilisiert. Eine fehlregulierte Arc‑Signalgebung wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext kognitiver Beeinträchtigungen und anfallsbezogener Netzwerkveränderungen untersucht.

Das Arc CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Arc-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Arc-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Arc nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Arc-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Arc-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Arc-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Arc-Exone abzielen, die für die Arc-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Arc-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Arc CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Arc CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Arc-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Arc HDR-Plasmid (m) und Arc HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Arc-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Arc-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.