Aquaporin 9/AQP9 Plasmide Double Nickase (h): sc-401298-NIC

AQP9 codifica l'acquaporina-9, un canale della membrana plasmatica che facilita il flusso transmembrana di acqua e piccoli soluti neutri, inclusi il glicerolo e altri polioli, collegando così l'equilibrio osmotico al metabolismo intermedio. Negli epatociti e nelle cellule immunitarie, AQP9 contribuisce all'assorbimento del glicerolo e alla gestione del carbonio, influenzando i processi gluconeogenici e il metabolismo lipidico, oltre a partecipare alla regolazione del volume cellulare. La sua espressione è regolata da segnali infiammatori e metabolici, mettendo in relazione AQP9 con vie che governano il trasporto dei nutrienti, le risposte allo stress e le transizioni dello stato cellulare. Livelli deregolati di AQP9 sono stati riportati in contesti di disfunzione metabolica e di biologia delle malattie infiammatorie, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sul trasporto di membrana e sulla riprogrammazione metabolica.

Aquaporin 9/AQP9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AQP9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AQP9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AQP9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AQP9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.