Aquaporin 1/AQP1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419172-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aquaporin 1/AQP1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aquaporin 1/AQP1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Aquaporin 1/AQP1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Aqp1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 1/AQP1: sc-25287
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 1/AQP1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419172-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 1/AQP1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419172-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Aqp1** kodiert Aquaporin 1 (AQP1), einen tetrameren Membrankanal, der einen schnellen, selektiven Wassertransport über Plasmamembranen vermittelt und die osmotische Homöostase unterstützt. AQP1 wird stark im mikrovaskulären Endothel sowie in epithelialen Geweben exprimiert, wo es zum transepithelialen Flüssigkeitstransport, zur Regulation des Zellvolumens und zur physiologischen Barrierefunktion beiträgt. Über seine Effekte auf Membranpermeabilität sowie hydrostatische und osmotische Gradienten beeinflusst AQP1 Prozesse wie Ödembildung, angiogene Reaktionen und Flüssigkeitssekretion. Eine veränderte AQP1-Expression oder -Lokalisation wurde mit Störungen der renalen Konzentrierungsfähigkeit, vaskulärer Dysfunktion und einer fehlregulierten Gewebeflüssigkeitsbalance in Verbindung gebracht, wie sie für inflammatorische und neoplastische Mikroumgebungen relevant ist.
Aquaporin 1/AQP1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Aqp1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Aqp1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Aqp1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Aqp1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.