Plasmide CRISPR d'Activation (h) AQP11: sc-403957-ACT

L’AQP11 humaine code l’aquaporine‑11, un membre atypique de la famille des aquaporines, principalement localisé aux membranes intracellulaires et contribuant à l’homéostasie cellulaire de l’eau et des petits solutés. L’activité d’AQP11 est liée au maintien de l’intégrité du réticulum endoplasmique, à la régulation de l’équilibre osmotique et aux voies de protéostase qui influencent les réponses cellulaires au stress et la fonction des organites. Dans le rein et d’autres tissus sécrétoires ou à forte activité métabolique, une expression modifiée d’AQP11 a été associée à une perturbation de l’homéostasie des cellules tubulaires et à une susceptibilité accrue à des phénotypes de lésions liées au stress. Ces propriétés font d’AQP11 une cible utile pour étudier le transport membranaire, les processus associés au RE et des rôles dépendants du contexte dans une physiologie cellulaire pertinente pour les maladies.

AQP11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AQP11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AQP11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AQP11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AQP11 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.