apolipoprotein E/apoECRISPR激活质粒(h): sc-400860-ACT

APOE 编码载脂蛋白 E（apoE），是一种分泌型脂质结合蛋白，通过与 LDL 受体家族成员及硫酸乙酰肝素蛋白聚糖相互作用，介导胆固醇和甘油三酯的运输。ApoE 在脂蛋白颗粒的组装与清除中处于核心地位，并影响肝细胞、巨噬细胞和胶质细胞中的细胞脂质摄取、再分配以及稳态信号传导。在神经系统中，apoE 调控突触维持、神经炎症反应以及影响淀粉样 β（amyloid-β）处理的蛋白质稳态（proteostasis）通路。APOE 的遗传变异与表达差异与血脂异常和神经退行性变密切相关，因此成为研究脂质代谢机制以及脑内免疫—脂质串扰的重要靶点。

apolipoprotein E/apoE CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性APOE的表达。

apolipoprotein E/apoE CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的APOE基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于APOE转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性apolipoprotein E/apoE表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的APOE位点，并能够研究内源性位点上依赖于apolipoprotein E/apoE的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在APOE表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟apolipoprotein E/apoE通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。