Partículas Lentivirales de Activación (h) APOBEC3B: sc-401700-LAC

APOBEC3B (subunidad catalítica 3B de la enzima de edición de ARNm de apolipoproteína B) es una desaminasa de citidina que convierte citosina en uracilo en ADN monocatenario, contribuyendo a la restricción antiviral innata y al control de retroelementos endógenos. Su actividad se vincula con los procesos de replicación y reparación del ADN al generar lesiones que pueden procesarse y convertirse en mutaciones, influyendo así en la estabilidad genómica. La expresión desregulada de APOBEC3B se ha asociado con firmas mutacionales características observadas en múltiples tipos de cáncer y se estudia en el contexto de la evolución tumoral, las respuestas al daño del ADN y el estrés de replicación. Como miembro nuclear de la familia APOBEC, APOBEC3B se utiliza ampliamente para investigar mecanismos de mutagénesis, interacciones huésped–virus y determinantes de fenotipos impulsados por mutaciones en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral APOBEC3B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de APOBEC3B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral APOBEC3B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción APOBEC3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de APOBEC3B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo APOBEC3B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.