Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
APC8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406761
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- APC8 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico APC8, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: APC8 Anticuerpo (D-7): sc-514006
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
APC8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406761 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CDC23 codifica APC8, una subunidad central del complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C), una ligasa E3 de ubiquitina que coordina la progresión mitótica y la salida del ciclo celular al dirigir reguladores clave como la securina y las ciclinas a la degradación proteasomal. APC8 contribuye al ensamblaje del APC/C y al reconocimiento de sustratos, integrando señales de los puntos de control para asegurar la separación correcta de las cromátidas hermanas y el mantenimiento de la estabilidad genómica. A través de su papel en la proteólisis mediada por ubiquitina, CDC23 se vincula a vías que gobiernan el control del punto de control del huso, la temporización mitótica y las transiciones ordenadas por G2/M y la anafase. La desregulación de los componentes del APC/C y de los mecanismos asociados de control del ciclo celular se implica con frecuencia en trastornos proliferativos y fenotipos relacionados con la aneuploidía, lo que convierte a CDC23/APC8 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de defectos en la división celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO APC8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDC23 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDC23 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDC23 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína APC8.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDC23 para la investigación de la señalización de APC8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CDC23 críticos para la función de APC8
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDC23 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido APC8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido APC8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDC23. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR APC8 (h) y el plásmido HDR APC8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDC23 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDC23 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.