Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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AP-2μ1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403095-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AP-2μ1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AP-2μ1 Double-Nickase-Plasmid (h) und AP-2μ1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AP2M1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AP-2μ1: sc-515920
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AP-2μ1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403095-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AP-2μ1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403095-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP2M1 kodiert die µ1‑Untereinheit des Adapterprotein‑2‑(AP‑2-)Komplexes, einer zentralen Komponente der clathrinvermittelten Endozytose an der Plasmamembran. AP‑2µ1 erkennt Sortiermotive der Fracht und koordiniert den Aufbau des Clathrin-Mantels, um die Internalisierung und das Recycling von Rezeptoren, Transportern und anderen Membranproteinen zu regulieren. Über die Steuerung des Vesikeltransports beeinflusst AP2M1 die Abschwächung von Signalwegen, die Nährstoffaufnahme und die Dynamik synaptischer Vesikel und ist damit mit Prozessen wie dem Trafficking von Rezeptor-Tyrosinkinasen und GPCRs verknüpft. Eine Dysregulation der Funktion endozytischer Adapter wurde mit veränderter neuronaler und metabolischer Homöostase in Verbindung gebracht und ist häufig relevant für Studien zur Signalübertragung in Krebszellen, zu neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und zum Umsatz von Membranproteinen.
AP-2μ1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AP2M1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AP2M1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AP2M1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AP2M1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.