AP-2μ1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403095-NIC

AP2M1 codifica la subunità µ1 del complesso adattatore della proteina 2 (AP-2), un componente centrale dell'endocitosi mediata da clatrina a livello della membrana plasmatica. AP-2µ1 riconosce i motivi di smistamento del carico e coordina l'assemblaggio del rivestimento di clatrina per regolare l'internalizzazione e il riciclo di recettori, trasportatori e di altre proteine di membrana. Attraverso il controllo del traffico vescicolare, AP2M1 influenza l'attenuazione del segnale, l'assorbimento di nutrienti e la dinamica delle vescicole sinaptiche, collegandosi a vie quali il traffico dei recettori tirosin-chinasici e dei GPCR. La deregolazione della funzione degli adattatori endocitici è stata associata ad alterazioni dell'omeostasi neuronale e metabolica ed è spesso rilevante negli studi sulla segnalazione delle cellule tumorali, sui fenotipi del neurosviluppo e sul turnover delle proteine di membrana.

AP-2μ1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AP2M1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AP2M1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AP2M1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AP2M1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.