Plasmide Double Nickase (h) AP-2α: sc-400935-NIC

TFAP2A code le facteur de transcription AP‑2α, une protéine se liant à l'ADN de manière spécifique de la séquence, qui coordonne des programmes d'expression génique au cours du développement des cellules de la crête neurale, de la différenciation épidermique et de la morphogenèse cranio‑faciale. AP‑2α régule des promoteurs et des enhancers contrôlant la progression du cycle cellulaire, l'adhésion cellule‑cellule et la spécification des lignages épithéliaux, en intégrant des signaux issus de voies de signalisation du développement telles que WNT et des réseaux sensibles à l'acide rétinoïque. Une activité de TFAP2A dérégulée a été associée à des troubles congénitaux du développement et à des états transcriptionnels altérés dans le cancer, où des modifications des circuits régulateurs dépendants d'AP‑2α peuvent affecter la prolifération et la différenciation. Ces propriétés font de TFAP2A un locus utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel des choix de lignée et la biologie épithéliale dans des modèles cellulaires humains.

AP-2α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TFAP2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TFAP2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TFAP2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TFAP2A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.