ANT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400680

Descripción general

SLC25A5 codifica la translocasa de nucleótidos de adenina 2 (ANT2), un transportador de la membrana interna mitocondrial que intercambia ADP y ATP entre la matriz y el citosol, acoplando la fosforilación oxidativa a la demanda energética celular. ANT2 contribuye a la homeostasis del potencial de membrana mitocondrial y está vinculada funcionalmente a vías que regulan la bioenergética, el equilibrio redox y la supervivencia celular, incluidas la transición de permeabilidad y la señalización apoptótica. Como isoforma humana de amplia expresión y con regulación dependiente del contexto, ANT2 se estudia con frecuencia en estados proliferativos y de remodelación metabólica, donde los cambios en el flujo de ATP/ADP influyen en el crecimiento y las respuestas al estrés. La desregulación del transporte mitocondrial de nucleótidos y de la actividad de la familia ANT se asocia con fenotipos de disfunción mitocondrial y se ha investigado en contextos de metabolismo del cáncer y de enfermedades neuromusculares y neurodegenerativas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ANT2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC25A5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC25A5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC25A5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ANT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC25A5 para la investigación de la señalización de ANT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC25A5 críticos para la función de ANT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC25A5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ANT2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ANT2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC25A5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ANT2 (h) y el plásmido HDR ANT2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC25A5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC25A5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.