Plasmide CRISPR/Cas9 KO Annexin V (m): sc-419117

Présentation

Le gène murin **Anxa5** code l’annexine V, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca²⁺, qui s’associe au feuillet interne des membranes cellulaires et est rapidement recrutée sur les sites de remodelage membranaire. L’annexine V contribue à la réparation membranaire, au trafic vésiculaire et à la régulation de la dynamique du cytosquelette, et elle est largement utilisée comme marqueur moléculaire de l’exposition de la phosphatidylsérine lors de l’apoptose. Par ses interactions avec les phospholipides anioniques, l’annexine V influence des processus liés à la signalisation calcique et peut moduler des événements membranaires impliqués dans l’inflammation et la coagulation. Des altérations de l’expression ou de la localisation d’ANXA5 ont été associées à une dérégulation des réponses de mort cellulaire et à des contextes de lésion tissulaire, ce qui justifie son étude dans des modèles d’activation immunitaire, de biologie cardiovasculaire et de stress des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Annexin V (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Anxa5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Anxa5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Anxa5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Annexin V.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Anxa5 pour l'étude de la signalisation de Annexin V, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Anxa5 essentiels à la fonction de Annexin V
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Anxa5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Annexin V plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Annexin V plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Anxa5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Annexin V plasmide HDR (m) et le Annexin V (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Anxa5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Anxa5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.