Annexin V Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419117

Panoramica

Il gene murino Anxa5 codifica l’annessina V, una proteina legante i fosfolipidi dipendente dal Ca²⁺ che si associa al foglietto interno delle membrane cellulari e viene rapidamente reclutata nei siti di rimodellamento della membrana. L’annessina V contribuisce alla riparazione di membrana, al traffico vescicolare e alla regolazione della dinamica del citoscheletro, ed è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare dell’esposizione della fosfatidilserina durante l’apoptosi. Attraverso le sue interazioni con fosfolipidi anionici, l’annessina V influenza processi legati alla segnalazione del calcio e può modulare eventi di membrana rilevanti per l’infiammazione e la coagulazione. Un’espressione o una localizzazione alterata di ANXA5 è stata associata a risposte disregolate di morte cellulare e a contesti di danno tissutale, supportandone lo studio in modelli di attivazione immunitaria, biologia cardiovascolare e stress delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Annexin V (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Anxa5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Anxa5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Anxa5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Annexin V.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Anxa5 per lo studio della segnalazione di Annexin V, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Anxa5 critici per la funzione di Annexin V
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Anxa5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Annexin V CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Annexin V CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Anxa5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Annexin V Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Annexin V (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Anxa5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Anxa5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.