Plasmide CRISPR d'Activation (h) ANKFN1: sc-406947-ACT

Le gène humain **ANKFN1** code une protéine contenant des répétitions ankyrine et un domaine de type fibronectine III, supposée favoriser des interactions protéine–protéine et des fonctions d’échafaudage influençant l’organisation sous-cellulaire et la dynamique des voies de signalisation. Bien que ce gène reste imparfaitement caractérisé, son architecture en domaines suggère des rôles potentiels dans la coordination de processus associés au cytosquelette et de complexes régulateurs modulant les réponses cellulaires au stress et aux signaux de différenciation. Des études transcriptomiques et génomiques ont rapporté une expression altérée d’ANKFN1 ou des signaux d’association dans certains phénotypes neurologiques et du développement, ce qui en fait un candidat pour des investigations mécanistiques. La caractérisation des réseaux d’interactions dépendants d’ANKFN1 et des programmes transcriptionnels en aval peut éclairer la cartographie des voies dans des modèles cellulaires pertinents pour le développement tissulaire et la biologie des maladies.

ANKFN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANKFN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANKFN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANKFN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANKFN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANKFN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANKFN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANKFN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANKFN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANKFN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.