Plasmide Double Nickase (h) Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1: sc-400229-NIC

AGTR1 code le récepteur de l’angiotensine II de type 1 (AT1), un RCPG à sept domaines transmembranaires qui médie la majeure partie de la signalisation canonique de l’angiotensine II dans les tissus cardiovasculaires et rénaux. Après liaison du ligand, AGTR1 se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, la mobilisation du calcium et la signalisation via la PKC ; il peut également engager les voies MAPK/ERK, JAK/STAT, les ROS dépendantes de la NADPH oxydase, ainsi que des voies dépendantes de la β-arrestine, afin de réguler des programmes transcriptionnels, la prolifération, l’inflammation et le remodelage de la matrice extracellulaire. La désensibilisation du récepteur et son trafic, via les GRK et les β-arrestines, modulent en outre la durée du signal et les résultats de signalisation biaisée. Une signalisation d’AGTR1 dérégulée est impliquée dans l’hypertension, l’hypertrophie et la fibrose cardiaques, le remodelage vasculaire et les maladies rénales, ce qui justifie son utilisation dans des études portant sur la biologie du système rénine–angiotensine et les voies de réponse au stress.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGTR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGTR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGTR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGTR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.