Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400229-NIC

AGTR1 codifica il recettore dell’angiotensina II di tipo 1 (AT1), un GPCR a sette segmenti transmembrana che media la maggior parte della segnalazione canonica dell’angiotensina II nei tessuti cardiovascolari e renali. In seguito al legame con il ligando, AGTR1 si accoppia prevalentemente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, la mobilizzazione del calcio e la segnalazione tramite PKC; può inoltre coinvolgere le vie MAPK/ERK, JAK/STAT, la produzione di ROS dipendente da NADPH ossidasi e le vie mediate da β-arrestina, regolando programmi trascrizionali, proliferazione, infiammazione e rimodellamento della matrice extracellulare. La desensibilizzazione del recettore e il suo traffico mediati da GRK e β-arrestine contribuiscono ulteriormente a modulare la durata del segnale e gli esiti di segnalazione “biased”. Una segnalazione di AGTR1 deregolata è implicata in ipertensione, ipertrofia e fibrosi cardiaca, rimodellamento vascolare e malattie renali, a sostegno del suo impiego nello studio della biologia del sistema renina–angiotensina e delle vie di risposta allo stress.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGTR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGTR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGTR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGTR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.