Plasmide CRISPR d'Activation (h) Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1: sc-400229-ACT

AGTR1 code le récepteur de type 1 de l’angiotensine II (AT1), un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) à sept domaines transmembranaires qui médie la majeure partie de la signalisation canonique de l’angiotensine II dans les tissus cardiovasculaires et rénaux. Après liaison du ligand, AT1 se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, mobiliser le calcium et activer la PKC ; il peut aussi engager les voies MAPK/ERK, JAK/STAT, des voies génératrices d’ERO (espèces réactives de l’oxygène) et une signalisation dépendante de la β-arrestine qui module la désensibilisation et le trafic du récepteur. Ces cascades régulent la vasoconstriction, la sécrétion d’aldostérone, l’homéostasie du sodium et de l’eau, le remodelage vasculaire, l’inflammation et la fibrose. Une activité et une expression d’AGTR1 dérégulées ont été impliquées dans l’hypertension, l’hypertrophie cardiaque, les processus athéroscléreux et le remodelage associé à la maladie rénale chronique, ce qui en fait une cible largement étudiée dans la biologie de la voie du SRAA (système rénine–angiotensine–aldostérone).

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGTR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGTR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGTR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGTR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de AGTR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.