AMPKβ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403537

Visão geral

PRKAB2 codifica a subunidade regulatória β2 da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), uma quinase serina/treonina heterotrimérica que detecta o estado energético celular por meio da razão AMP/ADP em relação ao ATP. A AMPKβ2 contribui para a montagem e a localização do complexo e conecta a ativação a montante a cascatas de fosforilação que restringem programas anabólicos, ao mesmo tempo que promovem vias catabólicas, incluindo captação de glicose, oxidação de ácidos graxos e autofagia, por meio de interação cruzada com o mTOR e redes relacionadas de sensoriamento de nutrientes. Por meio dessas funções, a AMPKβ2 é relevante para estudos de adaptação ao estresse metabólico, homeostase mitocondrial e controle do crescimento celular. Alterações na sinalização da AMPK têm sido associadas a distúrbios metabólicos e à biologia do câncer, tornando o PRKAB2 um ponto útil para investigar a regulação dependente de energia de vias de proliferação e sobrevivência.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AMPKβ2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PRKAB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PRKAB2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PRKAB2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AMPKβ2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PRKAB2 para a investigação da sinalização de AMPKβ2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PRKAB2 críticos para a função AMPKβ2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PRKAB2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AMPKβ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo AMPKβ2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PRKAB2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AMPKβ2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR AMPKβ2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PRKAB2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PRKAB2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.