Plásmido Doble Nickase (h) AMPKβ1: sc-402952-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AMPKβ1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AMPKβ1 (h) y el plásmido de doble nickasa AMPKβ1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRKAB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AMPKβ1 Anticuerpo (Z14): sc-100357
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AMPKβ1 | sc-402952-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AMPKβ1 | sc-402952-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAB1 codifica la subunidad reguladora β1 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor central del estado energético celular que integra la disponibilidad de nutrientes con la demanda metabólica. AMPKβ1 favorece el ensamblaje y la estabilidad del complejo heterotrimérico de AMPK y contribuye a la selección de sustratos y a la asociación con el glucógeno, configurando programas de fosforilación que restringen las vías anabólicas y promueven procesos catabólicos generadores de ATP. A través de la señalización de AMPK, PRKAB1 influye en la regulación de mTORC1, la autofagia, la oxidación de ácidos grasos y la homeostasis de la glucosa en respuesta al estrés energético. La alteración de la actividad de la vía de AMPK se ha relacionado con disfunción metabólica y con la reprogramación asociada al cáncer de redes de crecimiento y adaptación al estrés, lo que convierte a PRKAB1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la señalización dependiente de la energía.
AMPKβ1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKAB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKAB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKAB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKAB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.