AMPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419101

Übersicht

Ampd3 kodiert die AMP-Deaminase 3 (AMPD3), ein Enzym, das die Desaminierung von AMP zu IMP katalysiert und damit zur Regulation des Adeninnukleotid-Gleichgewichts sowie der zellulären Energiecharge beiträgt. Durch die Modulation der AMP-Verfügbarkeit beeinflusst AMPD3 den Purinnukleotidstoffwechsel und verknüpft die Wahrnehmung energetischen Stresses mit nachgeschalteten metabolischen Anpassungen in Geweben mit dynamischem ATP-Umsatz. Eine veränderte AMP-Desaminierung kann die IMP/AMP-Pools verschieben und Signalwege beeinträchtigen, die mit Nukleotid-Salvage, mitochondrialer Funktion und Redox-Homöostase zusammenhängen. Eine Dysregulation des Purinstoffwechsels ist für Modelle metabolischen Stresses und des Gewebeumbaus relevant, wodurch Ampd3 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Mausmodellen darstellt.

Das AMPD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ampd3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ampd3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ampd3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AMPD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ampd3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AMPD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ampd3-Exone abzielen, die für die AMPD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ampd3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AMPD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AMPD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ampd3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AMPD3 HDR-Plasmid (m) und AMPD3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ampd3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ampd3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.