Plásmido Doble Nickase (h) ALS2CL: sc-417873-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ALS2CL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ALS2CL (h) y el plásmido de doble nickasa ALS2CL (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ALS2CL. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ALS2CL Anticuerpo (E-8): sc-377278
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ALS2CL | sc-417873-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ALS2CL | sc-417873-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ALS2CL (similar al extremo C-terminal de ALS2) codifica una proteína citosólica implicada en el tráfico de membranas y la dinámica endosomal, con interacciones descritas que la vinculan a vías de transporte reguladas por pequeñas GTPasas. ALS2CL se estudia en el contexto de la biología celular neuronal, donde la maduración de los endosomas, el reciclaje vesicular y el acoplamiento al citoesqueleto son esenciales para mantener la homeostasis y la señalización axonal. La alteración de la regulación del transporte endolisosomal y de vías relacionadas de proteostasis es relevante para la neurodegeneración, y ALS2CL se ha investigado junto con mecanismos asociados a ALS2 en la vulnerabilidad de las neuronas motoras. Como resultado, ALS2CL se utiliza con frecuencia como un nodo para explorar el tráfico intracelular, las respuestas al estrés y los programas de mantenimiento neuronal en modelos celulares humanos.
ALS2CL El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALS2CL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALS2CL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALS2CL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALS2CL alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.