Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase C (m): sc-419083

Présentation

Aldoc code pour l’aldolase C, une enzyme glycolytique qui catalyse le clivage réversible du fructose-1,6-bisphosphate en trioses phosphates, reliant l’utilisation du glucose à la production d’ATP en aval et aux flux biosynthétiques. Dans les tissus de souris, ALDOC est enrichie dans le système nerveux central et contribue à la compartimentation métabolique des neurones et des cellules gliales, soutenant des processus tels que la neurotransmission et l’équilibre redox. Au-delà de la glycolyse, des membres de la famille des aldolases peuvent influencer l’organisation du cytosquelette et la transduction du signal via des interactions protéine–protéine qui couplent le métabolisme à l’architecture cellulaire. Une expression altérée d’ALDOC a été utilisée comme marqueur de l’état métabolique et de l’identité cellulaire en neurobiologie, et la dérégulation des programmes glycolytiques est largement pertinente pour la neurodégénérescence, les réponses au stress ischémique et des modèles de maladies prolifératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aldoc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aldoc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aldoc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldolase C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aldoc pour l'étude de la signalisation de Aldolase C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aldoc essentiels à la fonction de Aldolase C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aldoc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldolase C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aldolase C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aldoc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldolase C plasmide HDR (m) et le Aldolase C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aldoc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aldoc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.