Akt1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-419071-LAC

Mouse Akt1 kodiert eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Effektor der PI3K-Signalübertragung fungiert und Signale von Wachstumsfaktoren und Nährstoffen integriert, um Zellüberleben, Proliferation, Stoffwechsel und Proteinsynthese zu regulieren. AKT1 phosphoryliert nachgeschaltete Zielproteine wie GSK3, FOXO-Transkriptionsfaktoren und TSC2, um die mTORC1-Aktivität, den Glykogenstoffwechsel und die Resistenz gegen Apoptose zu modulieren. In der biomedizinischen Forschung wird eine veränderte Akt1-Signalgebung häufig mit dysregulierter Insulin/IGF-Signalübertragung, aberranter Kontrolle des Zellzyklus und Stressantwort-Signalwegen in Verbindung gebracht, die zu krankheitsrelevanten Phänotypen beitragen. Durch seine starke Vernetzung in Signalwegen ist Akt1 ein häufig untersuchter Knotenpunkt zur Kartierung von Signalweg-Crosstalk und der funktionellen Folgen einer Umverdrahtung von Signalwegen in zellulären Modellen.

Akt1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Akt1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Akt1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Akt1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Akt1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Akt1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.