Plasmide CRISPR d'Activation (h) AIRE-1: sc-401225-ACT

Le régulateur auto-immun (AIRE ; AIRE-1) est un régulateur transcriptionnel nucléaire qui favorise la tolérance immunitaire centrale en induisant l’expression « promiscue » d’antigènes restreints à certains tissus dans les cellules épithéliales thymiques médullaires. Grâce à ses interactions avec des facteurs associés à la chromatine et avec la machinerie transcriptionnelle, AIRE soutient les voies de présentation antigénique et la sélection négative des lymphocytes T autoréactifs, façonnant ainsi le développement du répertoire des cellules T. La perturbation des programmes transcriptionnels dépendants d’AIRE est associée à une rupture de la tolérance immunitaire et à des auto-immunités spécifiques d’organe, notamment les syndromes polyendocriniens auto-immuns. AIRE est donc largement étudié dans le cadre du contrôle transcriptionnel, de la biologie des cellules épithéliales thymiques et des mécanismes sous-jacents à la susceptibilité aux maladies auto-immunes.

AIRE-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AIRE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AIRE-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AIRE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AIRE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AIRE-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AIRE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AIRE-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AIRE-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de AIRE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.