Plásmido CRISPR de Activación (m) Ah Receptor: sc-419054-ACT

El gen Ahr de ratón codifica el receptor de hidrocarburos de arilo (AhR), un factor de transcripción activado por ligando que detecta xenobióticos y metabolitos endógenos para regular programas de expresión génica que controlan la desintoxicación, la función de barrera y la modulación inmunitaria. Tras su activación, AhR se transloca al núcleo, se heterodimeriza con ARNT y se une a elementos de respuesta a xenobióticos para inducir dianas como Cyp1a1/Cyp1b1, integrándose con vías de estrés oxidativo, señalización inflamatoria y metabolismo. La actividad de AhR influye en la diferenciación de linfocitos T, la polarización de macrófagos, la homeostasis epitelial y redes transcripcionales asociadas al ritmo circadiano. La desregulación de la señalización de AhR se ha relacionado con una susceptibilidad alterada a enfermedades inflamatorias, respuestas a tóxicos y la biología del microambiente tumoral en modelos experimentales de ratón.

Ah Receptor El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ahr sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ah Receptor El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ahr en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ahr, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ah Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ahr y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ah Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ah Receptor en células tumorales con expresión de Ahr silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.