AGXT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419052
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AGXT El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AGXT, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AGXT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419052 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Agxt** codifica la alanina–glioxilato aminotransferasa (AGXT), una enzima peroxisomal dependiente de PLP que convierte el glioxilato en glicina y conecta el catabolismo de aminoácidos con la detoxificación del glioxilato. Esta actividad sostiene la homeostasis metabólica hepática al limitar la formación de oxalato e integrar el estado redox peroxisomal y el flujo de sustratos con el metabolismo mitocondrial y citosólico. La alteración de la función de AGXT se asocia con la acumulación de glioxilato y fenotipos de sobreproducción de oxalato que modelan vías implicadas en trastornos metabólicos tipo hiperoxaluria. Por ello, **Agxt** es una diana útil para estudiar la biología de los peroxisomas, el estrés oxidativo impulsado por metabolitos y las relaciones genotipo–metabolismo en sistemas murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AGXT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Agxt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Agxt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Agxt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AGXT.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Agxt para la investigación de la señalización de AGXT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Agxt críticos para la función de AGXT
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Agxt para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AGXT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AGXT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Agxt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AGXT (m) y el plásmido HDR AGXT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Agxt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Agxt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.