Plasmide CRISPR d'Activation (h) Agrin: sc-401256-ACT

Le gène humain **AGRN** code l’agrine, un grand protéoglycane à héparane sulfate de la matrice extracellulaire qui organise la signalisation synaptique et la communication cellule–matrice. L’agrine est surtout connue pour coordonner la formation et la maturation de la jonction neuromusculaire via la voie **LRP4–MuSK**, en favorisant l’agrégation des récepteurs de l’acétylcholine et la différenciation postsynaptique. Au-delà du muscle, l’agrine contribue à la synaptogenèse neuronale, à la polarité épithéliale et à la mécanotransduction en modulant des voies dépendantes des intégrines et des facteurs de croissance, ainsi que l’architecture de la matrice extracellulaire. Une expression et un processing (maturation protéolytique) dérégulés de l’agrine ont été associés à des maladies neuromusculaires ainsi qu’à des contextes neurodégénératifs et oncogéniques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier la stabilité des synapses, le remodelage matriciel et l’adhérence cellulaire.

Agrin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGRN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Agrin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGRN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGRN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Agrin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGRN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Agrin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Agrin dans les cellules tumorales présentant une expression de AGRN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.