Plásmido Doble Nickase (h2) AGAT: sc-405809-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)AGAT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AGAT (h2) y el plásmido de doble nickasa AGAT (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GATM. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) AGAT | sc-405809-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano GATM codifica la L-arginina:glicina amidinotransferasa (AGAT), una enzima mitocondrial que cataliza el primer paso comprometido de la biosíntesis de creatina al convertir arginina y glicina en guanidinoacetato, contribuyendo así a la amortiguación energética celular mediante el sistema creatina–fosfocreatina. La actividad de AGAT conecta el metabolismo de los aminoácidos con la función mitocondrial y las vías bioenergéticas, influyendo en tejidos con alta demanda de ATP e interfiriendo con las redes metabólicas del óxido nítrico y del metabolismo de un carbono a través de la disponibilidad de sustratos. La alteración genética de GATM se asocia con deficiencia de creatina y fenotipos neurometabólicos, y su expresión modificada se ha investigado en la fisiología renal y muscular, así como en respuestas más amplias al estrés metabólico. La edición génica de GATM en modelos celulares humanos permite estudios mecanísticos de la regulación de la vía de la creatina, del metabolismo mitocondrial y de las relaciones genotipo–fenotipo, incluida la validación de variantes y el desarrollo de ensayos funcionales para el flujo metabólico y la homeostasis energética.
AGAT El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GATM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GATM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GATM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GATM alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.