AFP/Alpha fetoprotein Plasmide Double Nickase (h): sc-400355-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AFP/Alpha fetoprotein Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AFP/Alpha fetoprotein Double Nickase Plasmid (h) e il AFP/Alpha fetoprotein Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AFP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AFP/Alpha fetoprotein Antibody (C3): sc-8399
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AFP/Alpha fetoprotein Plasmide Double Nickase (h) | sc-400355-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AFP/Alpha fetoprotein Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400355-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AFP codifica l’alfa-fetoproteina, una glicoproteina secreta altamente espressa durante lo sviluppo fetale e normalmente silenziata nel periodo postnatale nella maggior parte dei tessuti. L’AFP è collegata ai programmi di differenziazione degli epatociti e al passaggio trascrizionale da fetale ad adulto, e la sua ri-espressione riflette un’alterata regolazione genica in contesti epatici e delle cellule germinali. In biologia dei tumori, l’AFP è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare associato al carcinoma epatocellulare e ad alcuni tumori delle cellule germinali, a supporto di studi sullo stato delle cellule tumorali, sull’identità di linea e sulle reti trascrizionali oncogeniche. In quanto antigene circolante e associato al tumore, l’AFP funge anche da indicatore per studiare la dinamica della via secretoria e i cambiamenti nella produzione proteica legati allo stress.
AFP/Alpha fetoprotein Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AFP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AFP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AFP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AFP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.