AFAP-1L1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407503-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AFAP-1L1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AFAP-1L1 Double-Nickase-Plasmid (h) und AFAP-1L1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AFAP1L1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AFAP-1L1: sc-514788
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AFAP-1L1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AFAP-1L1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AFAP1L1 kodiert AFAP-1L1, ein aktinfilamentassoziiertes Adapterprotein, das Signalkomplexe mit der Umgestaltung des Zytoskeletts verknüpft. AFAP-1L1 ist an Prozessen wie der Organisation von Stressfasern, der Dynamik fokaler Adhäsionen und Veränderungen der Zellform beteiligt, indem es über Interaktionen die Signalgebung von Src-Familien-Kinasen an die aktinregulatorische Maschinerie koppelt. Durch die Modulation von Adhäsions- und Motilitätsprogrammen wird AFAP1L1 häufig im Zusammenhang mit invasivem Verhalten, epithelial-mesenchymalen Übergang (EMT)-ähnlichen Phänotypen und Modellen der metastatischen Dissemination untersucht. Eine veränderte AFAP1L1-Expression oder die Einbindung in entsprechende Signalwege wurde bei mehreren Tumorarten beschrieben, was seine Eignung als Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Migration und zu zytoskelettalen Signalnetzwerken unterstreicht.
AFAP-1L1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AFAP1L1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AFAP1L1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AFAP1L1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AFAP1L1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.