AFAP-1L1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407503-NIC

AFAP1L1 codifica AFAP-1L1, una proteina adattatrice associata ai filamenti di actina che collega i complessi di segnalazione al rimodellamento del citoscheletro. AFAP-1L1 partecipa a processi quali l’organizzazione delle fibre di stress, la dinamica delle adesioni focali e i cambiamenti della forma cellulare attraverso interazioni che accoppiano la segnalazione delle chinasi della famiglia Src ai macchinari di regolazione dell’actina. Modulando i programmi di adesione e motilità, AFAP1L1 è spesso studiato nel contesto del comportamento invasivo, di fenotipi tipo transizione epitelio-mesenchimale e di modelli di disseminazione metastatica. Alterazioni dell’espressione di AFAP1L1 o dell’attivazione delle sue vie sono state riportate in molteplici tipi di tumore, a supporto della sua utilità come nodo per studi meccanicistici sulla migrazione e sulle reti di segnalazione del citoscheletro.

AFAP-1L1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AFAP1L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AFAP1L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AFAP1L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AFAP1L1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.