Plasmide CRISPR/Cas9 KO AdSS2 (m): sc-419031

Présentation

Adss code l’adénylosuccinate synthase 2 (AdSS2), une enzyme clé de la biosynthèse de novo des purines, qui catalyse la conversion de l’IMP en adénylosuccinate, contribuant ainsi à la production d’AMP et au maintien de l’équilibre des nucléotides cellulaires. En contrôlant la disponibilité des nucléotides adéniniques, AdSS2 influence la synthèse d’ADN/ARN, le métabolisme énergétique et la capacité proliférative, et s’inscrit dans des programmes métaboliques qui couplent le flux des purines à la progression du cycle cellulaire. La perturbation des enzymes de biosynthèse des purines est associée à des phénotypes de croissance modifiés et à des réponses au stress, ce qui fait d’AdSS2 une cible pertinente pour l’étude de la reprogrammation métabolique en biologie du cancer et dans d’autres contextes où la demande en nucléotides est élevée. Dans des modèles murins, Adss constitue un nœud expérimentalement accessible pour disséquer la manière dont l’approvisionnement en purines limite la biosynthèse et les voies de signalisation dépendantes des nucléotides adéniniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AdSS2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adss dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adss, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adss à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AdSS2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adss pour l'étude de la signalisation de AdSS2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adss essentiels à la fonction de AdSS2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adss pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AdSS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AdSS2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adss. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AdSS2 plasmide HDR (m) et le AdSS2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adss pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adss définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.