Adh1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419005

Übersicht

Adh1 kodiert die Alkoholdehydrogenase 1, eine zytosolische Oxidoreduktase, die die NAD+/NADH-abhängige wechselseitige Umwandlung kurzkettiger Alkohole und Aldehyde katalysiert und damit zum zellulären Redoxgleichgewicht und zum Intermediärstoffwechsel beiträgt. In Mausgeweben unterstützt die ADH1-Aktivität den Alkohol- und Xenobiotika-Stoffwechsel und ist mit Signalwegen verknüpft, die die Aldehyd-Entgiftung, oxidativen Stress sowie die Lipid-/Carbonyl-Homöostase steuern. Störungen in der Verarbeitung von Alkohol/Aldehyden sind für Modelle von Leberschädigung, Entzündung und Stoffwechselstörungen relevant, da veränderte NADH/NAD+-Verhältnisse und die Anreicherung reaktiver Aldehyde die Mitochondrienfunktion und Signalübertragung beeinflussen können. Als Stoffwechselenzym mit breiter Substratspezifität wird Adh1 häufig in Studien zur Entgiftungskapazität und zur gewebespezifischen metabolischen Anpassung untersucht.

Das Adh1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adh1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adh1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adh1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adh1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adh1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adh1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adh1-Exone abzielen, die für die Adh1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adh1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adh1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Adh1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adh1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adh1 HDR-Plasmid (m) und Adh1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adh1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adh1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.