ADHβ Plasmide Double Nickase (h): sc-402141-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADHβ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADHβ Double Nickase Plasmid (h) e il ADHβ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADH1B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADHβ Plasmide Double Nickase (h) | sc-402141-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADHβ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402141-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADH1B codifica la subunità beta della deidrogenasi alcolica umana (ADHβ), un’ossidoreduttasi citosolica zinco-dipendente che catalizza la conversione NAD⁺-dipendente dell’etanolo e di altri alcoli a catena corta nelle corrispondenti aldeidi. Questa attività enzimatica si integra con la detossificazione delle aldeidi e con una più ampia omeostasi redox cellulare influenzando l’equilibrio NADH/NAD⁺ e intersecando così le risposte allo stress ossidativo e il metabolismo intermedio. Le variazioni genetiche e funzionali di ADH1B sono ampiamente studiate per il loro impatto sulla cinetica del metabolismo dell’etanolo e sul carico di acetaldeide, che può modulare la suscettibilità alla fisiopatologia correlata all’alcol e al danno tissutale associato. ADH1B funge inoltre da nodo metabolico rilevante per la ricerca in farmacogenomica e tossicologia che coinvolge substrati alcolici xenobiotici.
ADHβ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADH1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADH1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADH1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADH1B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.