Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 (h): sc-403213

Présentation

ADCY7 code l’adénylate cyclase 7 (AC7), une enzyme associée à la membrane qui convertit l’ATP en AMPc (AMP cyclique), un second messager qui contrôle la signalisation via la protéine kinase A (PKA) et EPAC, des programmes transcriptionnels, ainsi que la régulation par rétroaction des réponses immunitaires et inflammatoires. AC7 agit en aval des récepteurs couplés aux protéines G via Gαs et est modulée par Gβγ et d’autres signaux régulateurs, ce qui façonne des dynamiques d’AMPc spécifiques du stimulus. Dans les cellules humaines, la signalisation AMPc dépendante d’ADCY7 influence la production de cytokines, l’activation des leucocytes et les réponses au stress cellulaire, reliant ce nœud à des voies pertinentes pour l’inflammation et la défense de l’hôte. Des variations génétiques ou une régulation altérée des enzymes produisant l’AMPc ont été associées à une susceptibilité à des phénotypes inflammatoires et métaboliques, ce qui étaye des études mécanistiques d’AC7 dans des contextes cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADCY7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADCY7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADCY7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADCY7 pour l'étude de la signalisation de Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADCY7 essentiels à la fonction de Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADCY7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADCY7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 plasmide HDR (h) et le Adenylate cyclase 7/AC7/ADCY7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADCY7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADCY7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.