Plásmido Doble Nickase (h) adenosine deaminase: sc-402201-NIC

La ADA humana codifica la adenosina desaminasa, una enzima clave del metabolismo de las purinas que desamina de forma irreversible la adenosina y la desoxiadenosina para generar derivados de inosina, ayudando a mantener el equilibrio del pool de nucleótidos. Al controlar los niveles intracelulares y extracelulares de adenosina, la ADA influye en las vías de rescate, en la capacidad de síntesis de ADN y en la señalización ligada a receptores de adenosina que determina la activación y la diferenciación de las células inmunitarias. La actividad de la ADA está estrechamente acoplada al desarrollo de los linfocitos y a su capacidad proliferativa, y la alteración de su función se asocia fuertemente con fenotipos de inmunodeficiencia y una desregulación inmunitaria más amplia. Como resultado, la ADA se estudia ampliamente en la biología de los leucocitos, las respuestas al estrés de nucleótidos y las redes de señalización relacionadas con la inflamación.

adenosine deaminase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.